共聚焦顯微鏡的基本原理
傳統(tǒng)的光學顯微鏡使用的是場光源,標本上每一點的圖像都會受到鄰近點的衍射或散射光的干擾;激光掃描共聚焦顯微鏡利用激光束經(jīng)照明針孔形成點光源對標本內(nèi)焦平面的每一點掃描,標本上的被照射點,在探測針孔處成像,由探測針孔后的光電倍增管(PMT)或冷電耦器件(cCCD)逐點或逐線接收,迅速在計算機監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖像。照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的,焦平面上的點同時聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔,焦平面以外的點不會在探測針孔處成像,這樣得到的共聚焦圖像是標本的光學橫斷面,克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點。
共聚焦顯微鏡的生物領域
細胞形態(tài)學分析(觀察細胞或組織內(nèi)部微細結構,如:細胞內(nèi)線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、微管、微絲、細胞橋、染色體等亞細胞結構的形態(tài)特征;半定量免疫熒光分析);熒光原位雜交研究;基因定位研究及三維重建分析。
?、奔毎飳W:細胞結構、細胞骨架、細胞膜結構、流動性、受體、細胞器結構和分布變化
?、采锘瘜W:酶、核酸、FISH(熒光原位雜交)、受體分析
?、乘幚韺W:藥物對細胞的作用及其動力學
?、瓷韺W:膜受體、離子通道、細胞內(nèi)離子含量、分布、動態(tài)
?、瞪窠?jīng)生物學:神經(jīng)細胞結構、神經(jīng)遞質(zhì)的成分、運輸和傳遞、遞質(zhì)受體、離子內(nèi)外流、神經(jīng)組織結構、細胞分布
?、段⑸飳W和寄生蟲學:細菌、寄生蟲形態(tài)結構
⒎病理學及臨床應用:活檢標本診斷、腫瘤診斷、自身免疫性疾病診斷、HⅣ等
?、高z傳學和組胚學:細胞生長、分化、成熟變化、細胞的三維結構、染色體分析、基因表達、基因診斷
醫(yī)學領域編輯
共聚焦顯微鏡已經(jīng)在各種醫(yī)學領域廣泛應用,分類如下:
生物學
?、保患毎?、組織的三維觀察和定量測量
?、?;活細胞生理信號的動態(tài)監(jiān)測
⒊;粘附細胞的分選
?、?;細胞激光顯微外科和光陷阱功能
?、担还馄缀蟮臒晒饣謴?/div>
?、?;在細胞凋亡研究中的應用
神經(jīng)科學
?、?;定量熒光測定
⒉;細胞內(nèi)離子的測定
?、?;神經(jīng)細胞的形態(tài)觀察
耳鼻喉學
?、?;在內(nèi)耳毛細胞亞細胞結構研究上的應用
⒉;激光掃描共聚焦顯微鏡的熒光測鈣技術在內(nèi)耳毛細胞研究中的應用
⒊;激光掃描共聚焦顯微鏡在內(nèi)耳毛細胞離子通道研究上的應用
?、矗患す鈷呙韫簿劢癸@微鏡在嗅覺研究中的應用
腫瘤學
?、倍棵庖邿晒鉁y定
?、布毎麅?nèi)離子分析
?、硤D像分析:腫瘤細胞的二維圖像分析
?、慈S重建
內(nèi)分泌學
⒈細胞內(nèi)鈣離子的測定
?、裁庖邿晒舛ㄎ患懊庖呒毎瘜W研究
⒊細胞形態(tài)學研究:利用激光掃描共聚焦顯微鏡
血液病
?、痹谘毎螒B(tài)及功能研究方面的應用
⒉在細胞凋亡研究中的應用
眼科應用
?、崩眉す鈷呙韫簿劢癸@微鏡觀察組織、細胞結構
?、布咸厥獾臒晒馊旧诨铙w上觀察角膜外傷修復中細胞移行及成纖維細胞的出現(xiàn)
?、忱眉す鈷呙韫簿劢癸@微鏡觀察視網(wǎng)膜中視神經(jīng)細胞的分布以及神經(jīng)原的樹枝狀形態(tài)
?、慈S重建
腎臟病
可以系統(tǒng)觀察正常人腎小球系膜細胞的斷層掃描影像及三維立體影像水平,使圖像更加清晰,從計算機分析系統(tǒng)可從外觀到內(nèi)在結構,從平面到立體,從靜態(tài)到動態(tài),從形態(tài)到功能幾個方面對系膜細胞的認識得到提高。